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四步!轻松搞定 ELISA标准曲线制作与数据计算

csdh11 2025-01-18 18:36 25 浏览

酶联免疫吸附法(ELISA)由于其易于操作，可以简单地回答样本中有多少蛋白质、多肽、抗体这一基本问题，是实验室比较常用的一种检测方法。

而这种简单的分析方法的核心，就是标准曲线。没有它，我们的实验就变成了一个二元的“是/不是”测试。有了它，我们可以深入研究生物反应的细节。

有多少人对ELISA标准曲线拟合头痛？！实际上，不只是ELISA标准曲线拟合，其它各种有关的实验数据分析，都可以应用ELISA Calc进行数据分析。下面就跟随小编，看看怎么四步轻松搞定 ELISA标准曲线制作与数据计算！

第 一 步

在Excel表格中输入浓度和OD值

第 二 步

粘贴”数字部分贴入ELISA Calc

第 三 步

选择回归/拟合模型

拟合方式介绍：直线回归（常用）、二次曲线回归（常用）、三次曲线回归、Logit-log直线回归、Logistic曲线拟合1、Logistic(四参数)（常用）、Logistic(五参数)、Hill曲线拟合、指数曲线拟合、三次样条插值

是否扣本底？是否取对数？

1.很多 Kit 可以同时用多种方式进行拟合；

2.除了试剂盒推荐的拟合方式，其他的拟合方式也可以尝试；

3.双抗夹心法可以选择直线，二次，四参数三种；可以直接拟合，也可以采用扣除 O 孔本底后取对数的方式；

4.取单数可以采用单对数，或者双对数法都可以；单对数就是 X 值（浓度值取对数）；

5.Logit-log的拟合方法是用于竞争法的；竞争法也可以用四参数或者五参数的方式进行拟合。

点击“回归/拟合”

拟合结果判断：

先采用线性拟合，因为 OD值超过 2.0 后，用线性不好。可以点击“数据输入”改用：二次曲线法或者四参数；或者扣本底的直线回归，二次曲线法或者四参数；

扣本底的做法：

扣本底，对数的选择方式

点击“回归方程”可以复制后粘贴到其他的文件中。

方程拟合的好坏，还可以查看方程来检验，主要看r^2的值，越接近1，拟合效果越好。

第 四 步

由 Y 计算 Ｘ

1、从Excel表粘贴样品反应值数据，点击“粘贴”；

2、点击“计算”；

3、得到数据；

4、点击“复制”，然后可以粘贴到Excel中，得到计算后的数据

需注意的问题

1、二次曲线计算的结果会有两个解，要舍掉其中一个偏离度大的。

2、Log-logit的拟合方法是用于竞争法的，竞争法也可以用四参数或五参数的方式进行拟合。

3、样品的浓度等指标是根据标准曲线计算出来的，所以首先要把做标准曲线看作是比做正式实验还要重要的一件事，否则后面的实验结果无从谈起。

4、设置标准曲线样品的标准浓度范围要有一个比较大的跨度，并且要能涵盖你所要检测实验样品的浓度，即样品的浓度要在标准曲线浓度范围之内，包括上限和下限。而对于呈S型的标准曲线，尽量要使实验样品的浓度在中间坡度最陡段，即曲线几乎成直线的范围内。

5、最好采用倍比稀释法配制标准曲线中的标准样品浓度，ELISA试剂盒这样就能够保证标准样品的浓度不会出现较大的偏离。

6、检测标准样品时，应按浓度递增顺序进行，以减少高浓度对低浓度的影响，提高准确性。

7、标准曲线的样品数一般为7个点，但至少要保证有5个点。

8、做出的标准曲线相关系数因实验要求不同而有所变动，但一般来说，相关系数R至少要大于0.98，对于有些实验，至少要0.99甚至是0.999。

要想绘制出合格的标准曲线、使用好标准曲线，真心不易，必须将各个方面的条件都考虑进去，即对标准曲线的绘制也实行质量控制，只有这样, 才能得出理想的标准曲线。

文章来源于江莱生物（shjianglai666）

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